常規(guī)非編碼RNA表達質(zhì)粒載體是在多種哺乳動物細胞中轉(zhuǎn)染和表達非編碼RNA的高效工具。非編碼RNA是一類長度小于30個核苷酸或者大于200個核苷酸的功能性RNA，包括：小分子RNA（micro RNA, miRNA）、小干擾RNA（small interfering RNA, siRNA）、Piwi蛋白互作RNA（piwi-interacting RNA, piRNA）,小核RNA（small nuclear RNA, snRNA）、核仁小RNA（small nucleolar RNA, snoRNA）、基因間長鏈非編碼RNA （large intergenic non-coding RNA, lincRNA）、內(nèi)含子長鏈非編碼RNA（intronic long non-coding RNA, intronic lncRNA）、天然反義轉(zhuǎn)錄物（natural antisense transcripts, NAT）、增強子RNA（enhancer RNA , eRNA）和啟動子相關(guān)RNA（promoter-associated RNA , PAR）等。所有這些非編碼RNA均不被翻譯成蛋白質(zhì)，但是在許多細胞生理過程中扮演了重要角色，如DNA復(fù)制、表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、以及翻譯調(diào)控等。

常規(guī)的非編碼RNA表達質(zhì)粒載體使用RNA聚合酶II型啟動子驅(qū)動用戶定制的非編碼RNA的表達，可采用組織特異性、誘導(dǎo)型、或者驅(qū)動強度不同的啟動子以滿足不同的實驗需求。對于RNA聚合酶II介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄過程，其轉(zhuǎn)錄起始位點位于啟動子的3‘端，而終止位點位于Poly A序列。因此該載體的非編碼RNA序列的轉(zhuǎn)錄本帶有一些額外的上游和下游序列。

該載體可以用于轉(zhuǎn)染多種類型的哺乳動物細胞。在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染是將質(zhì)粒載體導(dǎo)入哺乳動物細胞中是最廣泛的方法。雖然近年來開發(fā)了不少更為先進的基因?qū)胼d體系統(tǒng)（如慢病毒載體、腺病毒載體、AAV載體和piggyBac等），但常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染仍被大多數(shù)實驗室使用，這主要得益于其在技術(shù)上的簡便性以及在各種類型細胞中的高效轉(zhuǎn)染率。常規(guī)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染的關(guān)鍵特點是短暫性，并且在宿主基因組中的整合效率非常低（通常小于1%）。

我們的非編碼RNA質(zhì)粒表達載體系統(tǒng)已經(jīng)過優(yōu)化，其在大腸桿菌中具有高拷貝復(fù)制能力，且對細胞具有高效轉(zhuǎn)染率。根據(jù)用戶選擇的篩選標記基因，可對轉(zhuǎn)染了該載體的細胞進行篩選或者可視化追蹤。

技術(shù)簡單：常規(guī)轉(zhuǎn)染即可把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞，相比起病毒載體需要進行病毒包裝，過程更簡單。

載體容量非常大：我們的載體總?cè)萘靠蛇_30 kb，其中質(zhì)粒骨架只占3 kb，有足夠大的容量可以放置客戶所感興趣的序列。

高水平表達：常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后，可以產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù)（每個細胞多達幾千拷貝），使外源基因能高水平表達。

瞬時轉(zhuǎn)染：常規(guī)質(zhì)粒在細胞里主要以游離DNA狀態(tài)存在，所以常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染也稱為瞬時轉(zhuǎn)染。然而，質(zhì)粒DNA也可以以非常低的概率永久整合到宿主基因組中（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染每10²~10⁶個細胞可能會有一個細胞的基因組被整合，整合效率取決于細胞類型）。如果將攜帶了藥物抗性基因或者熒光標記基因的載體轉(zhuǎn)到細胞中，在經(jīng)過擴大和傳代培養(yǎng)后，可以使用藥物篩選或細胞分選來獲得穩(wěn)定整合了該載體的細胞。

可轉(zhuǎn)染的細胞類型受限：不同類型細胞的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率差異很大。非分裂細胞比分裂細胞更難轉(zhuǎn)染，原代細胞比永生化細胞系更難轉(zhuǎn)染。一些重要的細胞類型更是難以轉(zhuǎn)染，如神經(jīng)元和胰島β細胞。另外，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染局限于體外細胞實驗，很少運用到活體實驗。

基因拷貝數(shù)在不同細胞中呈現(xiàn)差異性：盡管成功的轉(zhuǎn)染可以在單個細胞里產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù)，但不同細胞間卻有高度的差異性。在一些細胞中，質(zhì)粒拷貝數(shù)非常高，而在另外一些細胞卻是低拷貝甚至沒有。而病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)更傾向于相對均勻地把基因轉(zhuǎn)到細胞中。

Promoter: The promoter that drives your non-coding RNA of interest is placed here.

Non-coding RNA: The non-coding RNA of your interest is placed here.

SV40 late pA: Simian virus 40 late polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream non-coding RNA.

CMV promoter: Human cytomegalovirus immediate early promoter. It drives the ubiquitous expression of the downstream marker gene.

Marker: A drug selection gene (such as neomycin resistance), a visually detectable gene (such as EGFP), or a dual-reporter gene (such as EGFP/Neo). This allows cells transduced with the vector to be selected and/or visualized.

BGH pA: Bovine growth hormone polyadenylation. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.